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稳定细胞株的筛选

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产品名称: 稳定细胞株的筛选
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产品展商: 基尔顿生物科技(上海)有限公司
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稳定细胞株的筛选  的详细介绍

一、服务介绍

稳定细胞系是指将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选,筛选得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。常用物理方法(电转)、化学方法(脂质体等)、生物方法(病毒)。

二、实验原理

外源基因在细胞中的表达可分为两大类,一类是瞬时表达,一类是稳定表达(又叫长久表达)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,虽然可以达到高水平的表达,但通常只持续几天。后者外源DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因。建立稳定细胞株,一般是根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的**对靶细胞进行筛选。常用的抗性标记基因有潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)和嘌呤霉素(puromycin)。

三、实验流程

1、载体构建(表达质粒载体、病毒载体);

2、转染/感染;

3、目的蛋白初步检测;

4、***筛选;

5、目的蛋白再次检测(定性/半定量);

6、单克隆细胞株稳定性检测。

四、 客户提供

培养好的细胞

五、 公司提供:

基本实验步骤、图片、数据分析结果和稳定表达细胞株

实验周期:大约3-4月左右,具体需要根据细胞实验内容而定。

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