*新动态

肌炎动物模型

1 大鼠肌炎动物模型

(1)复制方法  取豚鼠骨骼肌,用刀式匀浆机匀浆,制备肌浆球蛋白,在成年Lewis大鼠的双侧脚掌、背部两侧、尾根部5点,皮下注射完全弗氏佐剂(CFA)加等量肌球蛋白悬液;**剂量按每点1ml/kg体重,每周**1次,连续4周。同时经腹腔注射百日咳杆菌原液,每只0.5ml,**数为4.0×10的10次方个。


(2)模型特点  大多数模型大鼠均表现出活动迟缓、行走摇摆、倦怠无力、呼吸急促或微弱、背部向上隆起、头部下垂、进食减少、生长缓慢等症状;**4周后,光镜下可见肌纤维呈不同程度的变性,胞质混浊肿胀,肌纤维横纹模糊或消失,肌组织间质内可见散在及灶性的**细胞、单核细胞浸润,部分肌纤维萎缩。组织切片酶组织化学染色显示肌细胞线粒体代谢异常,ATP酶显示Ⅰ、Ⅱ型肌纤维均受累。大鼠血清中肌球蛋白(myosin)特异性抗体含量明显增高。刀豆蛋白A诱导的T**细胞增殖明显。


(3)比较医学  过去的研究报道不同学者曾分别用家兔、豚鼠、人和鸡的骨骼肌匀浆**大鼠,通过结果比较发现,经过豚鼠和人的骨骼肌匀浆**过的动物肌炎症状更为严重。本模型制作方法通过采用豚鼠骨骼肌肌球蛋白加完全弗氏佐剂多次**大鼠(Lewis大鼠,系近交系品种,对自身**反应较为敏感),使其体内发生特异性**反应从而产***抗体,同时豚鼠骨骼肌与大鼠骨骼肌又具有抗原交叉性,制成实验性肌炎的动物模型


从动物的临床表现及病理活检情况看,与人类多发性肌炎相近,实验表明,同时腹腔注射百日咳杆菌原液的大鼠炎症反应比单纯皮下**注射肌球蛋白和弗氏佐剂的乳化物更加严重,这与以前的有些研究报道应用百日咳**腹腔注射的实验结果相符,但具体作用机制不明。在多发性肌炎的发病机制中,细胞**和体液**异常对肌肉均有不同程度的影响,但细胞**在其中占优势。本方法制作的肌炎模型,在模型动物的肌组织中有炎症细胞浸润、肌纤维变性及坏死等,说明模型制作过程中有细胞**反应参与,而这一结果的产生,是由于肌球蛋白的**诱导所形成的。刀豆蛋白A是T**细胞刺激原,通过非特异性活化多克隆T细胞来增强机体整体的T细胞**。因此,刀豆蛋白A诱导的T**细胞增殖代表了机体整体T细胞的**功能。


2 豚鼠肌炎动物模型

(1)复制方法  先用家兔新鲜纯骨骼肌制备肌匀浆:切碎肌肉后加pH 7.2ψ(H3PO4)=20%的缓冲液,冰水浴中用刀式匀浆机以1700r/min匀浆3次,一次5s,间隔30s。然后用4层纱布过滤,过滤液再用磨式匀浆机以3000r/min匀浆3次,一次5S,间隔30s。加去垢剂Triton-X-10,两者比例100:1,混合后25009×10min(4℃)离心,上清液即肌匀浆分装置-20℃冰箱备用。实验前肌匀浆与完全弗氏佐剂2:1混合,每周于豚鼠项背部皮下注射一次(0.2ml肌匀浆加0.1ml完全佛氏佐剂),共8周。


(2)模型特点  注射后1~2d,注射局部有0.5~1cm的硬节,**,1周后结节变软、有波动感、破溃,部分体温升高,2周时*明显,4周开始创口**,肿块逐渐变小,致8周时呈硬块。4~6周后出现不同程度的活动减少,体重减轻,毛色暗淡无光。注射后4周开始血肌酶(CK、LDH、AST)上升,6~8周达高峰;肌电图显示运动单位时限明显缩短、波幅降低、多相波增多;**4、6、8周时组织学检查均见以骨骼肌多发性炎症为特点的病理改变:镜下见横纹肌呈灶性分布的肌细胞变性、坏死和炎细胞浸润,间质小血管壁增厚,周围有炎细胞浸润。电镜下见肌原纤维明暗带消失,肌原纤维肿胀、断裂、出现空泡化,线粒体凝聚、空泡化、肌束间隙增宽,提示有肌萎缩。


(3)比较医学  人类发生多发性肌炎时其机体血清肌酶水平升高,肌电图呈肌原性损害,镜下病理组织学特征主要为肌纤维变性、坏死及炎症细胞浸润。兔骨骼肌与豚鼠骨骼肌具有抗原交叉性,以家兔骨骼肌匀浆与完全弗氏佐剂多次**豚鼠制成的实验性肌炎模型,在肌酶、肌电图和病理组织学方面的改变与人类肌炎有相似之处。

课题设计、基金申请、文章润色、实验外包 基尔顿生活欢迎您的咨询!

沪公网安备 31011302004463号