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细胞老是长不好?这3大误区你注意到了吗?

1、养细胞时要不要烧瓶口?不烧的话污染了咋办?

不要烧瓶口!

大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子,觉得这样可以避免污染。

不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑?

知道为什么吗?

烧瓶口烧的!

培养基一般都是用碳酸 / 碳酸氢根作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候,炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后,空气变冷,压力骤降,培养基中的碳酸就会转化成二氧化碳,释放出来。

培养基中的碳酸少了,当然会变碱。如果不烧瓶口的话,你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。当然多多少少还是会有一点越用越碱,因为室温还是比冰箱内的温度高。

如果大家习惯了烧瓶口,也未尝不可。


只是培养液变碱了怎么办呢?

有些人用稀盐酸或醋酸重新调 pH 值。这样做是不对的。因为虽然 pH 值暂时纠正了,但是培养基的缓冲能力也就没多少了。加了这样的培养液很快就会变黄。

正确的做法是把装培养基的瓶口拧松,放到二氧化碳培养箱中,过夜。让培养箱中的二氧化碳进入培养基。pH 值就可以纠正回来。


如果不想这么做,也可以在培养基中加 Hepes。

Hepes 不会挥发,随你怎么烧瓶口,培养液的颜色都不会变。

如果嫌加 Hepes 麻烦,把培养基分装到小瓶中也是个办法。让培养基开几次瓶就用完。

也可以用培养皿养细胞。培养皿的开口比培养瓶大,二氧化碳容易进入。

即使加的培养基很紫,放入培养箱后一会儿就能纠正成樱桃红。

如果还是坚持用培养瓶,瓶口一定要拧得很松,要那种再拧一圈就要掉下来才行。


2. 隔多久看一次我的细胞?为啥我一天到晚都在看,细胞老是长不好?

不要频繁看细胞!

对于初学者而言,养细胞就像养孩子一样,有空就要去看看。

细胞越是养不好,就越是经常去看。

实际上看细胞对细胞的生长没有任何好处,特别是对原代细胞或是**磁珠分选后,密度特别低的细胞。

培养基中的生长因子是非常有限的!

细胞好不容易自分泌一点儿促生长的因子在其周围,形成有利于生长的局部环境。

你跑去看细胞,培养瓶这么一晃,把因子都给晃散了!


3. 什么时候中止消化?

不要怕消化。

在传代的时候,初学者往往生怕细胞消化过度,早早地终止消化。

细胞没下来就使劲吹灯,吹得满瓶子都是气泡。

其实,用力吹打对细胞的损伤比消化更大!

实验室大师兄在做血管平滑肌原代的时候,37 度消化过夜,细胞也没事。我一般是等细胞完全变圆后再中止消化,细胞轻轻一晃就能下来。

还有,动作要轻柔,尽量不要产生气泡!气泡在破裂时的机械应力相当大,对细胞的伤害也是很大的!


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