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ELISA免疫测定,你真的学会了吗?

ELISA**测定目的是?

1.测定体液中的各种蛋白质,包括含量极少的蛋白质如甲胎蛋白等;

2.测定**,包括小分子量的甾体**等;

3.测定***和**;

4.测定病原体抗原,HBsAg、HBeAg等;

5.利用纯化的抗原检测标本中的抗体,例如抗-HBs等;



ELISA**测定原理

①使抗原(或抗体)结合到某种固相载体表面,并保持其**活性;

②使抗原(或抗体)与某种酶联结成酶标 抗原(或抗体),而且此酶标抗原(或抗体)既保留其**活性,又保留其酶活性;

③测定时将受检标本(抗体或抗原)和酶标抗原(或 抗体)按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应,再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开,结合 在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成比例;再加入酶反应底物后,底物被酶催化后变为有色产物,根据其颜色反应的 深浅进行定性或定量分析,以了解被测标本中抗体或抗原含量。


ELISA**测定步骤

1. 包被;

2. 加样:加稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔);

3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。

4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟;

5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml;

6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm处,以空白对照孔调零后测各孔OD值。


引起ELISA测定错误结果的原因

标本因素、试剂因素、操作因素。

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