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细胞培养中常见的几个问题与解决办法

通过多次与客户的交流和沟通,医生研工作人员发现,客户在收到细胞后,由于没有统专业的检查和处理,直接进行实验,以致于后期容易产生了一系列问题。针对客户对这一方面的知识的薄弱,医生研的技术人员经过总结,对于收到细胞怎样专业处理做了以下说明:


细胞培养


一、细胞培养中细胞收到之后的处理方法

常温运输的细胞,观察包装是否完好,瓶口是否漏液,然后显微镜先拍摄4x 、10x、 40x不同倍数下的照片各两张。放入培养箱稳定两小时后开始换液,贴壁细胞把培养基全部吸去,加入6ml新的培养基,悬浮细胞离心后,用6ml培养基重悬细胞。注意:细胞的培养环境。

低温运输的细胞,通常是用干冰寄送。

客户收到细胞后,观察干冰是否挥发,细胞是否溶解。没问题的话可以直接放入液氮罐保存,或者超低温冰箱(不超过7天)。


二、细胞培养中细胞冻存后,复苏效果不好

目前还有很多人采取4°、﹣20°各半小时再转入-80°冰箱,这方法不好控制,有的细胞适合,有的细胞就达不到理想效果。现可采用程序降温盒来冻存,降温盒内添加的异丙醇可以达到每分钟降一度的要求,操作也简单。

冻存液采用90%血清+10%DMSO。部分低分化或干细胞可以添加马血清冻存,另外可以先将冻存液配置成80%血清+20%DMSO,重悬细胞时用血清重悬,避免直接用DMSO对细胞吹打造成损伤。


三、细胞培养中细胞上有黑点

这种情况可能性就比较多了,判断黑点是在细胞表面,还是胞质内,还是在细胞外。细胞表面黑点增多可能是因为状态变差,可能是培养条件不适合导致,或者细胞活性降低。细胞质内黑点增多,先确认是否是多核细胞。细胞外有黑点,黑点游动则可能是**污染,不游动但随着培养时间增长黑点数量增多,应该检测是不是支原体污染,悬浮细胞多数有黑点,可能是碎片,可低速离心去除。腺癌多数是分泌因子,看着黑点增多。


四、细胞培养中培养基,血清怎么选

好和细胞来源用的什么品牌使用相同的血清。基础培养基进口和国产差别不大。专业的细胞公司使用的血清都是经过了大量细胞培养验证的,不要轻易更换,目前国内血清品牌较多,质量不齐。



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